دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز

تکنیک PCR با بهره‌گیری از اصول اولیه فرایند طبیعی سنتز DNA و همانندسازی، مولکول‌های DNA را در داخل لوله آزمایش کپی می‌کند. (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز).

اصول انجام واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR)

این روش تکثیر آزمایشگاهی می‌تواند با استفاده از دو الیگونوکلئوتید سنتز شده به نام پرایمر یا آغازگر (Primer) که به دنباله ژنومی هدف وصل می‌شوند، انجام شود؛ به طوری که این پرایمرها یک نسخه تک رشته از رشته اسید نوکلئیک هدف را مورد شناسایی قرار داده و تکثیر می‌کنند. در انواع مختلف واکنش‌های زنجیره پلیمراز (PCR) رشته‌های اسید نوکلئیک توسط یک آنزیم پلیمرازی به نام Taq پلیمراز (یک DNA پلیمراز مقاوم دما استخراج شده از باکتری‌های ترموفیلوس) تکثیرمی‌شوند (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز).
واکنش‌های PCR در دستگاه‌های ترموسایکلر انجام می‌گیرند. در این دستگاه در یک فرآیند خودکار چرخه‌های مکرری (معمولاً 25 تا 40 چرخه) از مراحل واکنش‌های پلیمریزاسیون انجام می‌گیرد (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز).

اجزای اصلی برای انجام انواع واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR)

1. الگوی DNA:DNA نمونه‌ای که حاوی توالی هدف برای تکثیر است.
2. تری فسفات‌های دی‌ئوکسی ریبونوکلئوزید (dNTPs)
3. بافر PCR
4. آغازگرها (رو به جلو و معکوس)
5. – Taq پلیمراز (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز)

کاربردهای مختلف تکنیک‌های PCR

هر کدام از تکنیک‌های PCR که در بالا معرفی شد، در زمینه‌های مختلف پزشکی و زیست شناسی کاربردهای متعددی دارند. در زیر به برخی از این کاربردها اشاره می‌شود:

1. شناسایی و شناخت ویژگی‌های عوامل عفونی یا پاتوژن‌ها
2. تشخیص مستقیم میکروارگانیسم‌ها در نمونه‌های بیماران
3. شناسایی میکروارگانیسم‌های رشد یافته در محیط کشت
4. تشخیص مقاومت ضد میکروبی
5. بررسی ارتباط‌های بین پاتوژن‌های مختلف
6. انگشت نگاری ژنتیکی (Genetic fingerprinting) ؛ از این روش در آزمایشات پزشکی قانونی و آزمایش‌های تعیین والدین استفاده می‌شود.
7. تشخیص جهش (بررسی بیماری‌های ژنتیکی)
8. شناسایی جهش‌های ژنتیکی ( تشخیص بیماری‌های ژنتیکی)
9. کلونینگ ژن
10. تعیین توالی به وسیله PCR (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز)

انواع واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR)

تغییرات متعددی در روش متداول PCR برای افزایش استفاده از آن در روش‌های تشخیصی پزشکی و سایر کاربردهای ژنتیکی ایجاد شده است. انواع تکنیک‌های مشتق شده از تکنیک PCR شامل:

1. RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR): الگوی اولیه در PCR-RT، مولکول RNA تک زنجیرهای است.
2. PCR-Nested: در ایـن روش بـه منظـور افزایش حساسیت PCR از دو جفت پرایمر استفاده میشود.
3. PCR-Multiplex: در این روش از چند جفت پرایمر اختصاصی برای هدفهـای مختلـف اسـتفاده میشود.
4. ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System-PCR): برای تشخیص موتاسیونهای نقطـهای بکار میرود و از دو جفت پرایمر استفاده میشود. در این روش، واکنش در دو لوله جداگانه انجام میشود که یکی از آنها حـاوی پرایمرهای نوع موتاسیون یافته و دیگری حاوی پرایمرهای نـوع معمولی است (دوره تکنسین آزمایشگاه در تبریز).
5. Real-Time PCR به طور عمده در بررسی های کمی بیان ژن به کار می رود ولی در تعیین میزان ویروس های یک نمونه هم تکنیکی قوی و حساس به شمار می آید، البته این تکنیک کاربردهای فراوانی دیگری هم چون بررسی میزان تأثیر دارو درمانی، سنجش آسیب های DNA، تشخیص عوامل بیماری زا، تعیین ژنوتیپ افراد، سنجش تفکیک شدن آللی و … دارد.
6. در این روش از یک مولکول گزارشگر فلوروسنت برای مشاهده پیشرفت PCR استفاده می شود و قدرت سیگنال فلوئورسنت تولید شده ارتباط مستقیمی با مقدار مولکول‌های تکثیرشده دارد. در این تکنیک میزان محصولاتی که حین یک آزمایش PCR تولید می‌شوند با میزان محصولات تولید شده طی آزمایش‌های PCR با مقدار نوکلئیک ‌اسید آغازکننده مشخص، مقایسه می‌شود و امکان پی بردن به مقدار نوکلئیک اسید اولیه موجود در نمونه، برای ما فراهم می شود (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز).

 پی سی آر و ویرویس کرونا (PCR and covid-19)

آزمون COVID-19 RT-PCR یک آزمایش برای تشخیص کیفی اسید نوکلئیک از SARS-CoV-2 در نمونه های تنفسی فوقانی و تحتانی است (مانند سواب های حلق یا حلق)، خلط، آسپیرات دستگاه تنفسی تحتانی ، شستشوی برونکوآلوئولار و شستشو / آسپیرات حلقی) از افراد مشکوک به COVID-19 و همچنین نمونه های تنفسی فوقانی (مانند سواب های حلق یا حلق ، سوراخ بینی ، یا سواب های میان توربینی) قابل انجام است. به علاوه برای افراد بدون علائم مشکوک به عفونت COVID-19 نیز قابل انجام و شناسایی است. (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز)

 اهمیت PCR و RT-PCR

این تکنیک در طیف وسیعی از تخصص‌های پزشکی، از جمله بیماری‌های عفونی، سرطان، تعیین آنتی ژن لکوسیتهای انسانی (که به بررسی و پیش‌بینی عملکرد سیستم ایمنی می‌پردازد)، انعقاد و فارماکوژنومیک (پیش بینی ژنتیکی اینکه کدام دارو بهترین عملکرد را خواهد داشت) مفید هستند. به علاوه تشخیص مولکولی برای شناسایی بیماری‌های عفونی مانند کلامیدیا، ویروس ها، سل یا سویه خاصی از ویروس H1N1 استفاده می‌شود بنابراین با دانستن روش های انجام این تکنیک میتوان در ازمایشگاه های گوناگونی فعالیت کرد (دوره آزمایشگر PCR و PCR-RT در تبریز).